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黃嘌呤氧化酶XOD酶活檢測(cè)方法

2020-12-24

1原理

Xanthine + O2 + H2O (XOD)-----Uric acid + H2O2

Uric acid的生成可以通過(guò)290nm的光吸收進(jìn)行檢測(cè)。

2試劑:

A 10mM黃嘌吟溶液

B 50mM Tris-HCl 緩沖液,pH7.5

C酶稀釋液:B溶液

3操作規(guī)程:

3.1儀器參數(shù)設(shè)定

若儀器中無(wú)已保存參數(shù),按以下參數(shù)設(shè)定。若已有相關(guān)參數(shù),調(diào)取后確認(rèn)。

檢測(cè)方法:動(dòng)力學(xué)掃描

測(cè)量波長(zhǎng):290nm

延迅時(shí)間:60S

系數(shù)/因子:2.46

3.2樣品準(zhǔn)備

反應(yīng)時(shí)間:180S

積分時(shí)間:120S

測(cè)量溫度:37±0.5°C

若待測(cè)樣品為固體,可以按10mg樣品/l00ul超純水比例溶解。溶解后于2-8度放置

30mino

3.3檢測(cè)方法

3.3.1在石英比色皿中加入0.10ml試劑A, 2.80ml試劑B ,于37度孵育2min。

3.3.2加入l00ul樣品,溫和混勻后開(kāi)始測(cè)定。

3.3.3測(cè)定結(jié)束后,記錄相應(yīng)數(shù)值:起始讀數(shù)、△A/min、活性值(U/ml)。

3.3.4活性值(U/ml)范圍為0.10-0.25U/ml,若超出范圍,待測(cè)樣品需經(jīng)試劑B稀釋后再

次進(jìn)行檢測(cè)。

3.3.5計(jì)算公式 活性(U/ml) =△A 290nmx2.46xdf (稀釋倍數(shù))