尿嘧啶DNA糖苷酶(UNG、UDG)來源于大腸桿菌重組克隆表達(dá),分子量為25kDa,可催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶。UNG酶對(duì)RNA無活性,主要應(yīng)用于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的防污染。
如果在PCR反應(yīng)中以dUTP替代dTTP摻入DNA中,形成了含dU堿基的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈DNA中U堿基的糖苷鍵,降解該P(yáng)CR擴(kuò)增產(chǎn)物。
活性定義:37℃條件下,1小時(shí)降解1μg含dU堿基的單鏈DNA的酶量為1單位。
保存:-20℃,避免反復(fù)凍融。
貯存溶液:20mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,1mM DTT,0.05% Tween20,50%glycerol,pH8.0。
質(zhì)量控制:1:SDS-PAGE電泳純度大于98%;
2:降解活性、批間差異、穩(wěn)定性;
3:1U UNG在37℃處理3分鐘后,103拷貝以下含U模版應(yīng)完全降解,不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物;:
4:無外源核酸酶活性,無外源內(nèi)切、外切核酸酶污染。